薄層色譜TLC操作要點
鋪板
鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠,板容易出現拖動或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間,根據經驗來定,與空氣濕度有關,一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,也影響板涂層的厚度,進一步影響上樣量。涂層薄,點樣易過載;涂層厚,顯色不那么明顯。通常,板的質量對薄層鑒別的影響不是很大,影響zui大的是展開劑的配制和展開系統的飽和。
點樣
盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性,只用1微升的點樣管。這樣,點的斑點較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干。
展開劑配制
選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑?;旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑,會造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務有不同的要求,盡量達到實驗室儀器的zui高度,比如:取1ml的溶劑,應使用1ml的單標移液管,移液管應符合計量認證要求,盡管多數時候這不是必須的。
展開系統的飽和
一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺,斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達到飽和,防止邊沿效應,飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當然動作應該盡量輕、快。
溫濕度的控制
溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計主要是影響薄層板的吸附能力,導致選擇性(容量因子)的變化,濕度應根據實際情況確定。溫度控制使用空調器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸。
顯色
噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。